Sur les rongeurs et les puces

A partir de rongeurs capturés vivants (qui sont des réservoirs potentiels du bacille de la peste), la recherche de Y. pestis s’effectue à partir d’un broyat de la rate de l’animal euthanasié. Au préalable, il est important de débarrasser ces animaux de leurs puces par brossage de leur pelage. La présence du bacille de la peste dans les puces récoltées est recherchée à partir du broyat d’un lot de puces.

La recherche d’anticorps anti-F1 est réalisée sur le sérum des rongeurs obtenu après décantation du sang recueilli par ponction cardiaque ou sur le sang total séché sur buvard. Sur les cadavres de rats, la recherche de Y. pestis ou la détection de l’antigène F1 s’effectue par test bandelette à partir des ponctions ou des broyats de rate. (réf 269)

Caractères bactériologiques et culturaux

Y. pestis est une Entérobactérie Gram négative, aérobieanaérobie facultative. Dans les produits pathologiques elle se présente sous forme de cocco-bacilles à coloration souvent bipolaire (Wayson, Gram), immobiles, très souvent isolés, parfois ovoïdes ou globuleux.

En culture, elle présente un certain pleiomorphisme : sur gélose les formes bacillaires plus allongées prédominent tandis qu’en bouillon ce sont des coccobacilles en amas ou en courtes chaînettes, parfois en rangées parallèles.

Dans les cultures anciennes, on observe des formes de dégénérescence, éléments arrondis, piriformes, en massue mais asporulés. Le diagnostic de la peste par examen microscopique d’un frottis est peu spécifique et peu sensible.

La croissance de Y. pestis est possible de 4°C à 42°C mais la température optimale se situe entre 28° et 30°C. Ce bacille tolère des pH de 5 à 9,6, l’optimal étant entre 7,2 et 7,4. La croissance de Y. pestis est lente. Après 48h, la culture en milieu liquide (bouillon ordinaire, cerveau cœur, eau peptonée) reste limpide avec un voile fragile et un dépôt floconneux (ou des stalactites granuleux). Girard avait l’habitude d’utiliser l’aphorisme “ tout germe qui, au sortir de l’organisme, trouble le bouillon et pousse en 24h n’est pas la peste ”.

En milieu gélosé cerveau-coeur après 48h, Y. pestis se présente sous forme de fines colonies (diamètre <1mm), mates et translucides, rappelant un œuf au plat. Dans les foyers d’endémie pesteuse où les prélèvements sont souvent contaminés, l’emploi d’un milieu YCIN, plus sélectif contenant des antibiotiques (Cefsulodine, Irgasan, Novobiocine) permet d’améliorer le taux de confirmation et d’observer après 36 heures des petites colonies (diamètre 1mm), mates au centre rouge et légèrement bombées. (réf 236)

Enrichissement par inoculation chez la souris

Les rongeurs de laboratoire (souris, rat) sont généralement sensibles à Y. pestis, et succombent par septicémie en 3 à 10 jours après l’injection d’un échantillon pesteux. Pour augmenter la sensibilité du diagnostic bactériologique, il est recommandé d’inoculer le prélèvement suspect à des souris, par voie intra-péritonéale.

Le décès de la souris par la peste doit être confirmé par l’isolement de Y. pestis à partir du sang ou de la rate de l’animal. (ref 236)

Détection de Y. pestis par PCR

La méthode d’amplification génique (PCR) est reconnue pour sa sensibilité et sa capacité à détecter des bacilles difficiles à cultiver ou non viables (après antibiothérapie). Mais, dans les conditions opérationnelles du programme de lutte contre la peste à Madagascar, la PCR F1 est difficilement applicable et n’est actuellement pas recommandée en raison des mauvaises conditions de prélèvement et d’acheminement des échantillons cliniques. (réf 254)